一、实验目的

   1.学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。

   2.掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。

   3.掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。 

二、实验原理

    1.（1）紫外-可见吸收光谱法又称紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。

       （2）紫外光：10-400 nm，可见光：400-780 nm，可被人们的眼睛所感觉

       （3）紫外-可见吸收光谱的特点：带光谱、分子光谱。

       （4）应用：根据最大吸收波长可做定性分析；根据朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）可做定量分析。

           a.定性分析原理：

                吸收曲线：吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状

           b.定量分析原理：

            根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。

            定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。

         2. 本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。

   （1）蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275--280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。

   （2）由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，所处的微环境也不同，所以不同蛋白质溶液在280nm的光吸收职也不同。据初步统计，浓度为1.0 mg/mL的1800种蛋白质及蛋白质亚基在280nm的吸光度在